免疫羊驼

1. 免疫羊驼

实验流程 
  
 1.     抗原混合
  
 1.1     将抗原从-80℃冰箱中拿出，常温溶解，避免反复冻融。做好标记。
  
 1.2抽取抗原：根据抗原浓度抽取800μg，添加无菌超纯水至体积1000μl，混匀，加入同体积弗氏佐剂1000μl，共2ml混合进行乳化。
                                          
 2.     羊驼免疫和采血
  
 2.1羊驼选择：选择健康强壮、精神状态良好、体型适中的羊驼，挑选的羊驼毛色光亮，无受伤不适症状。挑选好动物，先预养1周左右以淘汰有些不合格的动物，使后期的实验能顺利进行。
  
 2.2免疫：挑选好羊驼并确保动物适合，记录耳号后开始免疫实验。每次在羊驼颈部淋巴结附近分左右两侧注射，每侧分2点注射，每点注射1ml乳化抗原。免疫后观察30min确认羊驼状态良好，无不适症状，每2周免疫一次。
  
 2.3采血和血清分离：在每次免疫前进行采血用于免疫评价，采血从羊驼颈部静脉采取，每次取5ml血液，3000rpm离心10min，分离保存上层血清。
                                                                                  
 3.     分离外周血单个核细胞（PBMC）
  
 3.1 将离心机预温至25℃，使用前关闭刹车；
  
 3.2 在50ml离心管中分别加入15mlPBS和15ml新鲜血液进行稀释，翻转数次混匀；
  
 3.3加15ml分离液于新50ml离心管中，向分离液管中加入稀释好的血液，小心缓慢以防止血液和分离液混匀；
  
 3.4500 g离心30min，观察离心管中血液分离情况，用200μl移液器小心吸取出中间棉层免疫细胞至新的15ml离心管中，上层血清保存在新的离心管中，-80℃保存；
                                          
 3.5 向单核细胞液中加入3倍体积PBS缓冲液混匀，400g离心15min；
  
 3.6 去除上清液，每管加入3mlPBS缓冲液混匀并进行细胞计数，400g离心20min；
  
 3.7去除上清液，根据细胞数目使用RNAiso Plus溶解分离得到的淋巴细胞108/mL溶解液，-80℃保存。

2. 羊驼的免疫系统是抵抗癌症的新疗法？！

免疫疗法抗癌新突破！诺贝尔医学奖由美、日学者抱回泌尿外科好助手　达文西手臂精准下刀蜂蜜能帮助人类制造塑胶替代物？！改善塑胶污染问题！吓！妇人颈椎被癌细胞吃塌陷才知肺癌末期  羊驼是一种奇萉的动物，除了外型呆萌呆萌，掳获了不少大、小朋友的心之外，也很有自己的个性，若是惹到它们，小心会使出大绝招「吐口水」来回敬你！如此傲骄的动物，在医疗人员眼中，羊驼竟有着与众不同之处，那就是它们的免疫系统非常独特，能产生一种奈米抗体(nanobody)，阻断一款在癌细胞中过度表达的生长因子。
   表皮生长因子的过度表达助长癌症茁壮 
  来自布鲁塞尔自由大学与西班牙生物医学研究所(IRB Barcelona)的研究人员，确定羊驼的奈米抗体可以阻断表皮生长因子(Epidermal growth factor)表达。表皮生长因子(EGF)对于调节细胞生长、增值和分化有着重要的作用，但当其过度表达时，会与许多癌症的发生有关，可以帮助癌细胞的增值，成为助癌帮凶，例如肺癌、大肠癌等。
  因此，表皮生长因子成为癌症治疗的一项标靶要点。过去，许多研究人员试图找到阻止表皮生长因子表达的方法，并且开发了几种抑制剂，但是成效不如预期的好，而且患者可能在短时间内产生抗药性。
   羊驼免疫系统独特 能产生「奈米抗体」　 
   
  借由本次实验，研究团队首次发现了一项奈米抗体(nanobody)，这些抗体专门存在于骆驼科中对羊抗生素有效的羊驼，并且可以阻断表皮生长因子的过度表达。这些抗体称作「单域抗体（sdAb）」，单域抗体为一种重组的抗体片段。他们在科学期刊《Angewandte Chemie》发表了一篇文章，描述了这些奈米抗体的亲和力和选择性的分子机制。
  这是一项致力于羊驼的独特免疫系统来产生新分子的治疗方式。羊驼是极少数能够自然产生单域抗体的动物，它们比普通抗体小得多，所以被称为「奈米抗体」，且比传统抗体便宜、更容易大规模生产，为癌症药物治疗带来崭新的篇章。
   新型奈米抗体 能用于对 EGF抑制剂产生抗药性之患者 
  布鲁塞尔自由大学团队利用新兴的生物技术工具，合成出第一种对 EGF具有高度亲和力且能紧密结合的分子抑制剂。研究人员表示，新型奈米抗体或许可用于目前对 EGF抑制剂产生抗药性的患者，但接下来还是得先经过动物实验，确认抗体是否真的能发挥药理作用。